Antysensowne hamowanie białka zapalnego makrofagów 1- blokuje niszczenie kości w modelu choroby szpiczaka kości ad 5

Podobne wyniki zaobserwowano w dwóch niezależnych eksperymentach (* P <0,05; ** P <0,01). Jak pokazano na Figurze 5, zwierzęta infuzowane komórkami EV-ARH rozwinęły lityczne zmiany kostne i zwiększyły tworzenie OCL (górny prawy panel, pokazany przez czerwoną oporną na kwas winianową barwę fosfatazy [TRAP]). Natomiast zwierzęta infuzowane komórkami AS-ARH nie wykazywały zwiększonego tworzenia OCL ani resorpcji kości (dolny prawy panel). Ponadto, obciążenie nowotworem w kościach zwierząt leczonych komórkami AS-ARH (górny lewy panel) było znacznie zmniejszone w porównaniu ze zwierzętami, którym podawano infekowane puste komórki z transdukcją wektora (dolny lewy panel). Komórki AS-ARH można było histologicznie wykrywać w sekcjach szpiku kostnego od zwierząt transfekowanych konstruktem antysensownym do MIP-1 (3, ale były one rzadkie. Histomorfometryczna analiza trzonów kręgów tych zwierząt wykazała, że liczba OCL na milimetr kwadratowy kości i na milimetr powierzchni kości była znacząco zmniejszona u zwierząt otrzymujących komórki AS-ARH w porównaniu z komórkami EV-ARH (Figura 6). Procent guza na całkowitą powierzchnię kości był również znacząco zmniejszony u zwierząt traktowanych komórkami AS-ARH w porównaniu ze zwierzętami traktowanymi komórkami EV-ARH. Nie było wzrostu guza pozaszpikowego, określonego przez przerzuty do wątroby i śledziony (dane nie przedstawione). Figura 5 Histologia przekrojów kostnych od myszy SCID wszczepionych komórkami EV lub AS-ARH. Jak pokazano na panelach zabarwionych hematoksyliną i eozyną (H & E), myszy wszczepione komórkami AS-ARH miały znacznie zmniejszone obciążenie nowotworem w porównaniu z myszami wszczepionymi komórkami EV-ARH. Liczba OCL była znacznie zmniejszona u myszy SCID wszczepionych komórkami AS-ARH w porównaniu z myszami wszczepionymi komórkami EV-ARH. Figura 6 Analiza histomorfometryczna przekrojów kostnych myszy SCID. Myszy traktowane komórkami AS-ARH miały znacznie zmniejszone obciążenie nowotworem w porównaniu z myszami otrzymującymi komórki EV-ARH. Ponadto liczba OCL na milimetr kwadratowy powierzchni, liczba OCL na milimetr kwadratowy powierzchni kości i procent aktywnej powierzchni OCL były istotnie zmniejszone u myszy AS-ARH w porównaniu z myszami EV-ARH (* P <0,05 ). W celu określenia, czy zmniejszone obciążenie nowotworem i niszczenie kości u myszy SCID wszczepionych komórkami AS-ARH w porównaniu z komórkami EV-ARH wynikało ze zmniejszonego naprowadzania i wszczepiania komórek AS-ARH, myszy przeszczepiono komórkami i uśmiercono w 3 dniu. odstępy czasu po transplantacji. Jak pokazano na Figurze 7, poziomy ekspresji mRNA specyficznego wobec człowieka GAPDH u myszy z przeszczepionymi komórkami AS-ARH zmniejszały się w dniu 3 w porównaniu ze zwierzętami w infuzji z komórkami EV-ARH, ale były wykrywalne. Poziom ludzkiego GAPDH zmniejszył się dodatkowo w dniach 9 i 15. Figura 7 Poziomy ekspresji mRNA GAPDH specyficznego dla człowieka od myszy SCID wszczepionych komórkami EV- lub AS-ARH w 3 do 15 dni po wlewie komórek. Myszy infuzowano EV lub AS-ARH jak opisano w Methods i zabijano w 3-dniowych odstępach. Próbki szpiku zebrano i przebadano pod względem ekspresji mRNA GAPDH (hsGAPDH) specyficznej dla człowieka przez analizę RT-PCR z seryjnym rozcieńczaniem. Ilość hsGAPDH obecna w szpiku kostnym myszy SCID w dniach 3, 9 i 15 była znacznie zmniejszona w porównaniu z ilością EV-ARH. HsGAPDH był wykrywalny do 15 dni w szpiku kostnym myszy SCID w infuzji z komórkami AS-ARH. Przeciwnie, poziomy hsGAPDH u myszy z przeszczepionymi komórkami EV-ARH były co najmniej dwa logy wyższe w porównaniu z myszami infuzowanymi komórkami AS-ARH. Startery GAPDH, które mogły wykryć zarówno mysi GAPDH jak i mysie ludzkie, zostały użyte jako kontrola wewnętrzna (tGAPDH). Od MIP-1. wzmaga ekspresję cząsteczek adhezyjnych na komórkach (11, 12), następnie ocenialiśmy, czy zmniejszenie obciążenia nowotworem u przeszczepionych zwierząt z komórek AS-ARH wynikało ze zmniejszonego przylegania komórek AS-ARH do komórek zrębowych szpiku. Jak pokazano na Figurze 8a, przyleganie komórek AS-ARH do komórek szpiku ST2 było zmniejszone w porównaniu z komórkami EV-ARH. Następnie mierzono poziomy mRNA dla integryny w komórkach EV-ARH i AS-ARH. Wykazano, że integryny VLA-4 (a4. 1) i VLA-5 (a5. L) pośredniczą w przyleganiu komórek szpiczaka do komórek zrębowych szpiku (13, 14). Jak pokazano na Fig. 8b, poziomy ekspresji mRNA a4 były podobne w komórkach AS-ARH i komórkach EV-ARH, niezależnie od traktowania neutralizującym Ab do MIP-1. lub rhMIP-1 .. Przeciwnie, ekspresja mRNA a5 i a1 była zmniejszona i została zwiększona przez dodanie MIP-1. w komórkach AS-ARH. Ponadto, traktowanie komórek WT-ARH i EV-ARH anty-MIP-1. Ab zmniejszyło ekspresję 5 ^ 1. Aby potwierdzić, że ekspresja a5 była obniżona na poziomie białka, przeprowadzono analizę Western blot [hasła pokrewne: sushi a karmienie piersią, eve online polska, polskie produkty spożywcze ] [hasła pokrewne: eve central, ostrzykiwanie osoczem cena, eve online forum ]