Antysensowne hamowanie białka zapalnego makrofagów 1- blokuje niszczenie kości w modelu choroby szpiczaka kości czesc 4

Komórki WT-, EV- i AS-ARH (105) hodowano w sześciostudzienkowych płytkach zawierających pożywki RPMI-1640 zawierające 10% FBS. W dniach 3 i 5 hodowli pobrano próbki komórek, wybarwiono błękitem trypanu i policzono. (b) Komórki ST2 (104) w PEM zawierającym 10% FBS wysiewano na plastry zębiny w 48-studzienkowych płytkach. Po 24 godzinach do hodowli dodano komórki WT-, EV- i AS-ARH (104) w pożywce RPMI-1640 zawierającej 10% FBS. W dniach 4 i 7 hodowli, żywotne komórki oceniano jak opisano powyżej. Wskaźniki wzrostu komórek WT-, EV- i AS-ARH nie różniły się istotnie w obecności lub nieobecności komórek ST2 hodowanych wspólnie na skrawkach zębiny. (c) Kondycjonowane pożywki z komórek WT-, EV- lub AS-ARH (105 / ml) hodowanych w pożywce RPMI-1640 zawierającej 10% FBS zebrano w dniu 3, a poziomy ekspresji MIP-1. zmierzono za pomocą MIP-1. Zestaw ELISA zgodnie z protokołem producenta. Podobne wyniki zaobserwowano w trzech niezależnych eksperymentach (* P <0,0001). Następnie przeszczepiono myszy SCID, które wcześniej poddano radioterapii nasiennej, komórkom 3 x 106 AS-ARH, EV-ARH lub WT-ARH w celu określenia ich wpływu na rozwój choroby szpiczaka kości i obciążenie nowotworem u tych zwierząt. Myszy SCID przeszczepione komórkami AS-ARH miały medianę przeżycia, która była dłuższa w porównaniu z myszami, którym wstrzyknięto komórki WT-ARH lub EV-ARH (AS-ARH, 28. 4 dni vs. WT-ARH, 20. 2 dni, lub EV-ARH, 23. 3 dni). Wyniki te nie osiągnęły istotności statystycznej (P = 0,06) ze względu na dużą zmienność w przeżyciu tych zwierząt w trzech niezależnych eksperymentach. Jednak we wszystkich doświadczeniach myszy AS-ARH żyły dłużej niż myszy EV-ARH lub WT-ARH. Zwierzęta otrzymujące komórki WT lub EV-ARH rozwinęły paraplegię przed śmiercią z powodu zajęcia kręgosłupa przez szpiczaka. W przeciwieństwie do tego, zwierzęta otrzymujące komórki AS-ARH nigdy nie rozwinęły paraplegii, ale zmarły z powodu wyniszczającej choroby, najprawdopodobniej odzwierciedlającej pozaszpikową aktywność szpiczaka. Jak pokazano na rysunku 3a, MIP-1. poziomy zostały zredukowane do poziomu prawie niewykrywalnego (<10 pg / ml) w osoczu szpiku z kręgów lub kości udowych zwierząt przeszczepionych komórkami AS-ARH. Przeciwnie, poziomy ludzkiego MIP-1 (3, chociaż zmienne, były znacząco podwyższone w osoczu szpiku od zwierząt przeszczepionych albo komórkami WT-ARH, albo komórkami EV-ARH. Ponadto, jak pokazano na Fig. 3b, poziomy ludzkiej IgG, które są wskaźnikiem obciążenia nowotworem, były znacząco zmniejszone w osoczu szpiku u zwierząt wszczepionych komórkami AS-ARH (0,1. 1,0. G / ml) w porównaniu z EV- Komórki ARH lub komórki WT-ARH (80. 120. G / ml). Figura 3 Surowactwo myszy SCID wszczepionych komórkami WT-, ET- lub AS-ARH i ekspresja MIP-1. in vivo. Komórki WT-, EV- i AS-ARH podawano dożylnie myszom SCID (n = 10 na grupę), jak opisano w Metodach i uśmiercono, gdy stali się paraplegiczni. Kości i kręgi zostały następnie usunięte, a osocze krwi szpikowej otrzymane przez płukanie kości ml wolnej od surowicy krwi MEM. Poziomy ekspresji hMIP-1. (a) i ludzkie IgG (b) mierzono zestawami ELISA. hMIP-1. ekspresja u myszy wszczepionych komórkami AS-ARH została zredukowana do poziomu prawie niewykrywalnego. Ludzkie poziomy IgG, które są wskaźnikami obciążenia nowotworem, były istotnie zmniejszone u myszy AS-ARH w porównaniu z myszami WT- lub EV-ARH, ale nadal były wykrywalne (0,1 .l .g / ml). Podobne wyniki zaobserwowano w trzech niezależnych eksperymentach (* P <0,0001). Następnie ustaliliśmy, czy osocze szpiku z myszy SCID wszczepionych różnymi liniami komórkowymi ARH może stymulować tworzenie OCL w hodowlach ludzkich szpiku. Jak pokazano na Fig. 4, osocze szpiku od zwierząt noszących komórki WT-ARH lub zwierzęta wszczepione komórkami EV-ARH stymulowało tworzenie OCL w hodowlach ludzkich szpiku. Aktywność stymulująca OCL obecna w osoczu szpiku od tych zwierząt była całkowicie zahamowana przez neutralizujący Ab do MIP-1. (Rysunek 4). Przeciwnie, osocze szpiku z myszy SCID wszczepionych komórkami AS-ARH nie stymulowało tworzenia komórek podobnych do OCL w hodowlach ludzkich szpiku. Figura 4 Wpływ osocza szpiku kostnego myszy SCID wszczepionych komórkami WT-, ET- lub AS-ARH na ludzką formację podobną do OCL. Osocze szpiku kostnego (10% obj./obj.) Od myszy SCID, którym podawano infuzję WT-, ET- lub AS-ARH, które uzyskano w czasie wystąpienia paraplegii, dodano do hodowli ludzkich szpiku kostnego w nieobecności egzogennie dodanego osteoklastogennego czynniki. rhMIP-1. (200 pg / ml) stymulowało tworzenie MNC podobnego do OCL, który był blokowany przez Ab neutralizujący MIP-1 (5 ng / ml). Osocze szpiku kostnego od myszy WT- lub EV-ARH stymulowało tworzenie MNC podobnego do OCL, które było zablokowane przez MIP-1. neutralizujący Ab. Przeciwnie, osocze szpiku kostnego od myszy AS-ARH nie stymulowało tworzenia MNC podobnego do OCL [więcej w: szpital bytom żeromskiego, łyżeczka cukru ile to gram, eve online polska ] [więcej w: szpital psychiatryczny lublin, pierwsza pomoc oparzenia, rezonans magnetyczny kościerzyna ]