Dysfunkcja śródbłonka naczyniowego wynikająca z niedoboru l-argininy u pacjenta z nietolerancją białka lizynowego ad

Ojciec pacjenta zmarł rok temu i nie było możliwe zbadanie jego genetycznego makijażu. Czynność śródbłonka naczyniowego badano przed i po infuzji L-argininy u pacjenta i dziesięciu zdrowych mężczyzn w wieku od 30 do 42 lat (średni wiek: 35,3 . 4,2 lat) jako normalnych kontroli (kontrola A). Niezależnie od śródbłonka rozszerzanie naczyń krwionośnych po podaniu nitrogliceryny mierzono również u pacjenta iu dziesięciu zdrowych mężczyzn w wieku od 25 do 44 lat (średni wiek: 36,3. 4,7 lat) jako normalnych kontroli (kontrola B). Pacjent nie otrzymał L-argininy ani nitrogliceryny przez co najmniej 2 tygodnie przed tym badaniem. Pacjent i prawidłowe kontrole były osobami niepalącymi i nie otrzymywały żadnych leków. Nie stwierdzono istotnych różnic w wartościach wyjściowych częstości akcji serca i ciśnienia krwi między pacjentem a grupą kontrolną (Tabela 1). Wszystkie osoby biorące udział w tym badaniu wyraziły pisemną, świadomą zgodę. RT-PCR, amplifikacja genomowego DNA, sekwencjonowanie i analiza mutacji. DNA i całkowite RNA ekstrahowano z leukocytów krwi obwodowej z pełnej krwi przy użyciu zestawu QIAGEN Blood & Cell Culture DNA Midi i QIAamp RNA Blood Minikit (oba, QIAGEN GmbH, Hilden, Niemcy) zgodnie z zalecanymi przez producenta protokołami. Sekwencję cDNA genu SLC7A7 uzyskano z GenBank AJ130718. Początkowo stosowano startery oligonukleotydowe oparte na sekwencji cDNA. Dodatkowe startery oligonukleotydowe przygotowano na podstawie zsekwencjonowanych danych wygenerowanych, gdy było to konieczne, w celu przedłużenia sekwencji nukleotydowej. Sekwencje primerów są dostępne na żądanie. Odczynniki do RT-PCR otrzymano z TaKaRa (zestaw RNA PCR [wirus ptasiej mieloblastozy] wersja 2.1, TaKaRa, Shiga, Japonia), a RT-PCR przeprowadzono zgodnie z zalecanym przez producenta protokołem. Szablony do sekwencjonowania genu SLC7A7 uzyskano stosując metodę PCR z polimerazą DNA LA-Taq (TaKaRa, Shiga, Japonia). Warunki PCR były następujące: gorący start przez 3 minuty w 96 ° C; 35 cykli denaturacji (96 ° C, 30 sekund), wyżarzania (58 ° C, 30 sekund) i wydłużania (72 ° C, 2 minuty). Produkty PCR oczyszczono z 1% żelu agarozowego i zsekwencjonowano w obu kierunkach przy użyciu zautomatyzowanego sekwenatora DNA (model 310) przy użyciu zestawu do gotowej reakcji ABC Prism BigDye Terminator Cycle Sequencing (oba, Perkin-Elmer, Courtaboeuf, Francja). Projekt badań dla funkcji śródbłonka naczyniowego. Badania przeprowadzono w izolowanym i kontrolowanym przez temperaturę pomieszczeniu (22. 24 ° C), podczas gdy badani znajdowali się na czczo. Tętno i ciśnienie krwi monitorowano w sposób ciągły podczas okresu badania. Odpowiedzi naczyniorozszerzające w tętnicach ramieniczych zmierzono przy użyciu techniki ultradźwiękowej, jak opisali inni (14, 25). W skrócie, średnicę tętnicy ramiennej mierzono z obrazów ultrasonograficznych w trybie B z użyciem przetwornika liniowego 7,5-MHz (system ultradźwiękowy SSA-380A, Toshiba, Tokio, Japonia). Prędkość przepływu tętnicy ramiennej mierzono za pomocą impulsowego sygnału Dopplera pod kątem 70 ° do naczynia z bramką zasięgu (1,5 mm) w środku tętnicy. Tętnicę ramienną skanowano w dole łokciowym w sposób podłużny. Po znalezieniu satysfakcjonującej pozycji przetwornika, powierzchnia skóry została zaznaczona, a ustawienie ramienia zostało zoptymalizowane na początku badania, a następnie utrzymywane na stałym poziomie przez cały okres rejestracji. Przedmioty leżały spokojnie przez 10 minut przed rozpoczęciem skanowania. Wyjściowe pomiary średnicy i prędkości przepływu w tętnicy ramiennej i pobraniu krwi do oznaczenia L-argininy i pochodnych NO (NOx) przeprowadzono 30 minut po dożylnym wlewie soli fizjologicznej z szybkością 6,7 ml / min przez 30 minut. Po tych podstawowych pomiarach, mankiet do pomiaru ciśnienia krwi został umieszczony wokół przedramienia i napełniony do ciśnienia 250-300 mmHg. Po 4,5 minuty mankiet został zwolniony. Średnicę i prędkość przepływu mierzono w sposób ciągły podczas napełniania mankietu i po opróżnieniu mankietu. Odpowiedzi rozszerzonej za pośrednictwem przepływu wykorzystano jako miarę zależnego od śródbłonka rozszerzenia naczyń krwionośnych (EDV). Po 15-minutowym odpoczynku rozpoczęto infuzję dożylną L-argininą (0,1 mg / ml) z szybkością 6,7 ml / min przez 30 minut. Trzydzieści minut po zakończeniu wlewu wykonano pomiary średnicy i prędkości przepływu w tętnicy ramiennej oraz pobranie krwi. Następnie zmierzono EDV po infuzji L-argininy. Protokół ten wykonano trzykrotnie w odstępach 1-tygodniowych na pacjencie i raz na każdą z kontroli A (n = 10). W innym dniu mierzono średnicę przed i 4 minuty po podjęzykowym podaniu nitrogliceryny (300 .g)
[podobne: eve forum, eve online poradnik, przelicznik gram na szklanki ]
[więcej w: dawstwo komórek jajowych, eve forum, nowotwór pęcherzykowy tarczycy ]