Komórkowa odpowiedź immunologiczna związana z chorobą u cukrzyków typu 1 z immunodominującym epitopem insuliny ad 5

Zastosowano limfocyty T od pacjenta P2, ponieważ wykazano, że peptyd B (9. 23) wiąże się z cząsteczkami HLA-DQ8 (DQB1 * 0302) (26), haplotypem, który jest jednym z najsilniej związanych i predyktywnych choroba (1, 27). Allel HLA-DQB1 * 0302 również wykazuje resztę kwasu nonaspartycznego (tj. Alaninę) w swoim. łańcuch w pozycji 57, reszta, która jest również charakterystyczna dla unikalnego powiązanego z chorobą haplotypu MHC I-Ag7 u myszy NOD (28). Tylko blokada cząsteczek DQ podczas prezentacji B (9. 23) całkowicie zahamowała proliferację krótkoterminowej linii komórkowej wytworzonej od tego osobnika (Figura 2), demonstrując, że odpowiedź związana z chorobą na B (9. 23) jest HLA klasy II ograniczone, a u tego pacjenta ograniczone jest do HLA-DQ8, a nie do cząsteczki DR4. Określiliśmy także powinowactwo wiązania peptydu B (9 (23) z cząsteczką DQ8 w teście wiązania kompetycyjnego, w którym peptyd B (9. 23) oceniano pod kątem jego zdolności do konkurowania ze standardowym wysokim powinowactwem. peptyd, biotynyl- (HSV-2) -VP16, do wiązania z cząsteczką HLA-DQ8. B (9. 23) skutecznie konkurował o wiązanie z HLA-DQ8 z powinowactwem wiązania (wartość IC50 0,4. M) bardzo podobnym do peptydu nieznakowanego (HSV-2) -VP16 (IC50 0,37. M). Niekonkurencyjny peptyd kontrolny, SWM (110-121), miał IC50 większe niż 100 .M. Figura 2 Rola HLA-DQ8 w odpowiedzi swoistej dla insuliny B (9-223) u pacjenta z cukrzycą typu 1. Łącznie 105 limfocytów T z krótkoterminowych linii komórkowych PBMCs traktowanych B (9. 23) z pacjenta P2 z cukrzycą typu P2, homozygotycznych pod względem HLA-DR4 (DRB1 * 0402/0405) i DQ8 (DQB1 * 0302), zostały leczonych w obecności lub pod nieobecność 20 .g / ml przeciwciała anty-DQ lub blokującego anty-DR. Te przeciwciała dodano do autologicznych PBMC stymulatora 30 minut przed dodaniem komórek T odpowiadających. Komórki hodowano przez 5 dni, podczas których do każdej studzienki pulsowano [3H] tymidynę przez ostatnie 18-20 godzin i policzono ilość włączonej radioaktywności. Przeciwciało kontrolujące izotyp nie miało istotnego wpływu na proliferację. Wartości to średnia cpm. SEM z trzech powtórzeń kultur z jednego eksperymentu reprezentatywnego dla trzech eksperymentów. Odpowiedź cytokin przez specyficzne dla B (9-223) pierwotne PBMC. Silna odpowiedź proliferacyjna B (9-223) linii komórek T od pacjentów z cukrzycą typu sugeruje, że znaczna liczba komórek T patogennych (tj. Produkujących IFN-y) B (9. 23) istnieje w krążenie tych pacjentów. Dlatego oszacowaliśmy częstotliwość i oszacowaliśmy produkcję cytokin tych komórek B (9. 23) w świeżo wyizolowanych PBMC przy użyciu testu ELISPOT. Ta technika ma wyjątkowe zalety w stosunku do innych testów wykrywania cytokin, ponieważ wykazuje bardzo wysoki stopień czułości i może być użyta do ilościowego określenia liczby komórek wytwarzających cytokiny specyficznych dla antygenu w heterogenicznej populacji receptorów komórek T (25). PBMC uzyskano od pacjentów z cukrzycą i osób kontrolnych i prezentowano za pomocą B (9. 23) lub pozytywnego mitogenu kontrolnego, PHA, na płytkach ELISPOT do oceny cytokin. Komórki wytwarzające IL-2 (3, IL-4a, IL-5p lub IL-13B nie zostały wykryte w hodowlach PBMC potraktowanych żadną nietraktowaną lub B (9 (23)) z kontroli bez cukrzycy (w tym wysokiego ryzyka) lub z cukrzycą. przedmioty (dane nie pokazane); jednak aktywacja hodowli za pomocą PHA wykazała pojawienie się tych komórek wytwarzających cytokiny (dane nie pokazane). Przeciwnie, leczenie wysoką dawką (50 (M) B (9. 23) indukowało znaczną liczbę komórek wytwarzających IFN – w hodowlach PBMC od wszystkich oprócz jednego badanego pacjenta z cukrzycą (tj. P8), podczas gdy wszystkie z badani osoby bez cukrzycy nie reagowali na leczenie B (9. 23) (Tabela 5, średnia i SEM zmiany wywołanej B (9. 23) [tj. SI] w liczbie komórek produkujących IFN. kultury C1-C26 wynosiły 1,11 . 0,2). Próbki z C12 i C13 zostały ujęte w Tabeli 5 jako przykłady niereagujących. Próbki krwi od pacjentów z cukrzycą P1, P3, P6 i P12 oraz osób kontrolnych C5, C9 i C11 nie były dostępne do analizy cytokin. Pacjenci z cukrzycą typu zareagowali w sposób zależny od dawki na B (9. 23), ponieważ znaczną liczbę komórek pozytywnych względem cytokin indukowano dawką 10. MB (9. 23) (patrz Figura 3 dla przykładu 10 i 50. MB (9. 23) indukowane specyficzne miejsca IFN – ). Brak odpowiedzi w próbach kontrolnych bez cukrzycy (tj. C) oraz w grupie P8 pacjenta i grupie wysokiego ryzyka, H3 i H4, nie został przypisany ogólnej anergii komórek, ponieważ komórki tych podmiotów, oprócz odpowiedzi wszyscy pacjenci z cukrzycą (tabela 5), odpowiedzieli na leczenie za pomocą PHA (średnia i SEM wywołanej PHA zmiany liczby komórek wytwarzających IFN. | w niekontrolowanych hodowlach C1 do C26 wynosiła 17. 8). Figura 3 Przykład odpowiedzi cytokin na insulinę B (9. 23) przez pacjentów z cukrzycą typu i osób kontrolnych
[więcej w: polskie produkty spożywcze, łyżeczka cukru ile to gram, eve poradnik ]
[hasła pokrewne: mięśnie grzbietu anatomia, eve online centrala, dawstwo komórek jajowych ]