Komórkowa odpowiedź immunologiczna związana z chorobą u cukrzyków typu 1 z immunodominującym epitopem insuliny ad 6

3 x 105 świeżo izolowanych PBMC od dwóch pacjentów z cukrzycą typu (P5 i P9) i dwóch dopasowanych wiekowo osób kontrolnych (C12 i C13) zaszczepiono na studzienkę 96-studzienkowej anty-IFN-y. Płytkę testową ELISPOT powleczoną mAb. w obecności lub nieobecności insuliny B (9. 23) i inkubowano w 37 ° C przez 24 godziny. Plamki reprezentujące komórki wytwarzające IFN-y (oznaczone przez liczbę w nawiasach) opracowano stosując biotynylowane anty-IFN-y. drugorzędowe przeciwciało i peroksydaza znakowana przez awidynę z substratem AEC i określone ilościowo przy użyciu analizatora immunologicznego serii-1. Tabela 5 Analiza ELISPOT IFN-y odpowiedź na insulinę B (9. 23) u chorych na cukrzycę typu 1, osób z prediabetią w grupie dużego ryzyka oraz pacjentów z prawidłową kontrolą bez cukrzycy Zajęliśmy się możliwością, że terapia insulinowa może być odpowiedzialna za zaobserwowane reakcje specyficzne dla B (9. 23). Należy zauważyć, że wszyscy chorzy na cukrzycę typu otrzymywali insulinoterapię w krótkim okresie przed pobraniem krwi (tj. 2. 127 dni), w którym P9 i P10 byli próbkowani tylko 2 dni po terapii insuliną. Ten krótki dwudniowy okres prawdopodobnie nie wystarcza, aby odpowiedź immunologiczna mogła rozwinąć się przeciwko egzogennej insulinie. Ponadto, dwóch diabetyków typu 2, C27 i C28, którzy otrzymali odpowiednio leczenie insuliną przez 5 i 20 lat, nie odpowiadali na B (9. 23) w 50. M (średnia i SE B (9. 23) – indukowana zmiana w komórkach wytwarzających IFN-y wynosiła odpowiednio 0,65 . 0,22 i 1,02. 0,11, a dla PHA odpowiednio 179. 17 i 49. 1). Jednak najbardziej przekonujące dowody na to, że terapia insulinowa nie odgrywała roli w rozwoju odpowiedzi B (9. 23) u diabetyków, została wykazana przez reaktywność na B (9. 23) przez trzy z pięciu prediabetycznych osób z wysokim ryzykiem pierwszego stopnia. krewni, którzy nigdy nie otrzymywali insulinoterapii (Tabela 5). Co ciekawe, jeden (tj. P10) dwóch pacjentów, którzy nie wykazywali odpowiedzi proliferacyjnej na B (9. 23) (patrz Tabela 4 i Figura 1) wykazał silną odpowiedź produkcyjną IFN-y na antygen (Tabela 5) sugerując, że specyficzne dla antygenu odpowiedzi w produkcji cytokin niekoniecznie muszą towarzyszyć odpowiedzi proliferacyjnej. Odpowiednio, IFN-y indukowany przez B (9-23) wytwarzanie przez wysokiego ryzyka krewnego pierwszego stopnia, H5 (tabela 5), również nie towarzyszyło odpowiedzi proliferacyjnej (patrz Tabela 4 i Figura 1). Zgodnie z wynikami proliferacji linii komórek T, wyniki te wskazują, że specyficzny dla B (9-223) IFN-y odpowiedź ogranicza się do pacjentów z cukrzycą typu i osób z prediabetią o wysokim ryzyku. Ponadto specyficzne dla B (9-223) komórki T miały fenotyp patogenny, jak wcześniej zdefiniowano u myszy NOD i, co najważniejsze, można je wykryć bezpośrednio w krążeniu za pomocą testu ELISPOT. Dyskusja Zgodnie z naturą autoantygenycznych epitopów w trzustce myszy NOD (4. 7), znaleźliśmy znaczące odpowiedzi komórek T na immunodominujący epitop B (9. 23) w krwi obwodowej wynoszący 92% (11 z 12; tj. odpowiedzi proliferacyjne i cytokiny) u pacjentów z cukrzycą typu o niedawnym początku, ale takie odpowiedzi były nieobecne u osób zdrowych z prawidłową pod względem wieku lub HLA. Te odpowiedzi anty-insuliny B (9. 23) nie będą prawdopodobnie wynikiem immunoreaktywności w terapii insulinowej, ponieważ nie wykryliśmy odpowiedzi komórek T na B (9. 23) w grupie kontrolnej z cukrzycą typu 2, które otrzymały terapia insulinowa. Ponadto, te odpowiedzi komórek T B (9. 23) były obecne w próbkach od pacjentów P9 i P10 tylko 2 dni po rozpoczęciu leczenia insuliną (wszystkie inne próbki od pacjentów uzyskano 2 do 10 tygodni po terapii insuliną). Co najważniejsze, trzy z pięciu osób z prediabetyczną grupą wysokiego ryzyka, które nigdy nie otrzymały insulinoterapii, odpowiedziały na B (9. 23) w teście ELISPOT. Stwierdzono wcześniej, że pomimo statystycznie istotnych różnic między osobami z grupy kontrolnej a pacjentami z cukrzycą typu o wczesnym początku w odpowiedzi komórkowej na CA, takie jak GAD, większość osób kontrolnych w rzeczywistości reaguje na autoantygeny, chociaż w mniejszym stopniu niż pacjenci z cukrzycą typu (12-16, 29). Co ciekawe, badania te wykazały również, że stopień i częstotliwość odpowiedzi na białka pełnej insuliny lub proinsuliny były porównywalne w grupie kontrolnej, wśród pacjentów z cukrzycą o niedawnym początku i ich krewnych, argumentując przeciwko istnieniu wyraźnych odpowiedzi komórkowych na insulinę w cukrzycy typu . Jednak analizując odpowiedzi na pojedynczy epitop insuliny [tj. B (9. 23)], który wydaje się odgrywać silną patogenną rolę w chorobie myszy NOD, po raz pierwszy dowiemy się, że osoby kontrolne wyraźnie nie reaguje na B (9. 23), co kontrastuje z prawie całkowitą reakcją grupy chorych na cukrzycę typu oraz z reakcją na ponad połowę badanych pacjentów pierwszego stopnia wysokiego ryzyka
[patrz też: polskie produkty spożywcze, ostrzykiwanie osoczem cena, eve forum ]
[hasła pokrewne: eve forum, nowotwór pęcherzykowy tarczycy, plazminogen ]