Mutacje NPHS2 w późnej fazie ogniskowej segmentowej stwardnienia kłębuszków nerkowych: R229Q jest powszechnym allelem związanym z chorobą czesc 4

Następnie zbadaliśmy te mutacje u członków tej rodziny przez trawienie endonukleazą PCR produktów restrykcyjnych. Jak pokazano na Figurze 1b, wszyscy dotknięci członkowie tej rodziny są heterozygotami złożonymi dla tych dwóch mutacji. Żadna niedotknięta osoba w rodzinie nie nosi tych dwóch mutacji, zgodnych z koseregacją wariantów sekwencji z chorobą w modelu recesywnym. Figura 1NPHS2 mutacje missense w rodzinie FS-W. (a) Chromatogramy sekwencji DNA. Po lewej: analiza sekwencji DNA eksonu 5 amplifikowana od chorego osobnika z rodziny FS-W. Przejście AG. A przewiduje substytucję Arg. Gln. Z prawej: analiza sekwencji DNA eksonu 7 pokazuje przejście C. T, w wyniku czego następuje substytucja Arg. Trp. (b) Kosegregacja mutacji z chorobą. Osoby dotknięte są pokazane przez wypełnione koła (kobieta) i kwadraty (mężczyzna). Elektroforeza w żelu agarozowym wykazuje obecność lub brak mutacji w rodzinie FS-W. U góry: mutacje R229Q wykryte przez trawienie ClaI. Mutacja punktowa G755A powoduje utratę miejsca ClaI, a zmutowane allele R229Q są pokazane przez górne prążki (545 bp), reprezentujące produkty PCR pozbawione miejsca ClaI. Dół: mutacje R291W zidentyfikowane przez trawienie PflMI. Mutacja C941T tworzy miejsce restrykcyjne PflMI i jest wizualizowana jako dwa prążki o 155 bp i 128 bp. Podatne osobniki są heterozygotami złożonymi dla R229Q i R291W. (c) Wyrównanie gatunków ortologów podocin. Sekwencje aminokwasowe kodowane przez ludzki NPHS2 (pozycje 221. 240, GenBank NP_055440), szczurzy NPHS2 (GenBank AF309631), mysie EST (GenBank AI552534), Drosophila melanogaster EST (GenBank AA141235) i Globodera rostochiensis EST (GenBank AW505792) zostały wyrównane przez program PILEUP (pakiet Wisconsin wersja 10.0 [Unix]; Genetic Computer Group, Accelrys, San Diego, Kalifornia, USA). Identyczne reszty aminokwasowe są oznaczone cieniowaniem. Pozostałość argininy w pozycji 229 jest zaznaczona strzałką. Przeanalizowaliśmy dotkniętych członków dodatkowych rodzin FSGS i odkryliśmy mutacje missense (R138Q, A284V, A288T, A297V, E310V i L327F) i dwie nowe pomniejsze delecje (923 / 2delAA i 1104delC) w modelach segregacji zgodnych z dziedziczeniem choroby recesywnej (Tabela 1) . Dwie z tych mutacji opisano wcześniej (9, 22). R229Q został zidentyfikowany jako polimorfizm (22). Delecja 2-bp przy nukleotydzie 923 (923 / 2delAA) powoduje przesunięcie ramki odczytu i zmienia sekwencję aminokwasową eksonu 7 po kodonie 285. Delecja pojedynczego nukleotydu, 1104delC, w eksonie 8 powoduje przesunięcie ramki odczytu i przedwczesne zakończenie w kodonie 347 , w ten sposób obcinając C-końcowe 36 aminokwasów. Znaleźliśmy mutacje koagregujące z chorobą w sumie z dziewięciu rodzin. W sześciu rodzinach (FS-W, FS-I, FG-BL, FG-BU, FG-DV, FG-EI) dotkniętymi osobnikami są heterozygoty złożone, aw jednym (FS-R) osobniki dotknięte chorobą są homozygotami . W dwóch rodzinach (FS-G i FS-XP) znaleziono tylko jedną mutację NPHS2; mutacje nie zostały wykryte w drugim allelu NPHS2. U tych pacjentów zsekwencjonowaliśmy całe regiony kodujące, a także granice intron-egzon. Podejrzewamy, że mutacje sekwencji kodujących uniknęły naszego wykrycia (jest to mało prawdopodobne) lub, że mutacje w niekodowanych regionach regulatorowych występują w drugim allelu. W 21 innych testowanych rodzinach FSGS nie znaleźliśmy prawdopodobnych mutacji NPHS2 powodujących choroby. Tabela Podsumowanie mutacji NPHS2 Kosegregację mutacji z chorobą ustalono przez bezpośrednie sekwencjonowanie lub trawienie enzymami restrykcyjnymi produktów PCR (dane nie pokazane). Warto zauważyć, że obserwowane mutacje wydają się skupiać w końcowej części karboksylowej podociny kodowanej przez eksony 5. 8 (z jednym wyjątkiem). Cztery mutacje typu missense (A284V, A288T, A297V i E310V) są zlokalizowane w regionie bogatym w alaninę i glutaminę, który jest wysoce konserwatywny w rodzinie białek w osoczu. Ten rozkład mutacji wydaje się kontrastować z szeroko rozpowszechnioną lokalizacją mutacji w rodzinach z wczesną postacią choroby (9, 14, 15, 22). Mutacje R229Q w rodzinnej FSGS. Mutację R229Q wykryto w sześciu z dziewięciu rodzin FSGS ze zmianami NPHS2. Przebadaliśmy mutację R229Q w kilku grupach osobników kontrolnych za pomocą trawienia IL-5 eksonu 5 amplifikowanego przez PCR. Odkryliśmy mutację R229Q obecną w populacjach badanych z następującymi częstościami alleli: 0,016 (1 z 64 alleli od osobników pochodzenia afrykańskiego) 0,031 (3 z 98 alleli od brazylijskich osobników), 0,036 (9 z 248 alleli z zróżnicowanego etnicznie, ale w dużej mierze północnoamerykański i zachodnioeuropejski panel próbek DNA) i 0,058 (6 ze 104 alleli pochodzących z Ameryki Północnej)
[więcej w: polskie produkty spożywcze, eve poradnik, olej z awokado właściwości ]
[więcej w: eve poradnik, eve online pl, łyżeczka cukru ile to gram ]