Onkogenna fuzja AKAP9-BRAF jest nowym mechanizmem aktywacji szlaku MAPK w raku tarczycy ad 6

Warunki byłyby jeszcze bardziej korzystne, gdyby potencjalnie rekombinogenne ogniska w obrębie domeny ramienia były często zestawiane ze sobą, jak wykazano w ludzkich komórkach tarczycy dla RET i H4, partnerów RET / PTC1 (46). W tym badaniu zaobserwowaliśmy znaczącą różnicę w mechanizmach aktywacji BRAF nie tylko między wczesnymi nowotworami związanymi z promieniowaniem i sporadycznymi nowotworami, ale także pomiędzy wczesnymi i późnymi nowotworami popromiennymi. Taka różnica nie jest bez precedensu. Podobne zmiany zaobserwowano wcześniej w odniesieniu do rearanżacji RET / PTC między nowotworami po Czarnobylu rozwijającymi się 10 lat lub mniej po ekspozycji i objawiającymi się po dłuższym opóźnieniu (34, 35). Rzeczywiście, ogólna częstość występowania RET / PTC była istotnie wyższa w poprzedniej grupie, a RET / PTC3 był najczęstszym typem. Natomiast nowotwory powstające po dłuższym opóźnieniu miały mniejszą częstość występowania RET / PTC, a dominującym typem był RET / PTC1, z których oba są cechami bardziej typowymi dla sporadycznych guzów. Niniejsze badanie pokazuje, że późne nowotwory popromienne również zajmują pozycję pośrednią w stosunku do dominującego mechanizmu aktywacji BRAF. Sugeruje to, że nowotwory powstające wczesniej po ekspozycji prawdopodobnie zostaną zainicjowane przez zdarzenia genetyczne związane z bezpośrednim uszkodzeniem popromiennym, takie jak rearanżacje chromosomalne występujące po pęknięciach dwuniciowego DNA. Jeśli chodzi o nowotwory rozwijające się po dłuższym okresie zwłoki, ich patogeneza może obejmować kombinację mechanizmów związanych z promieniowaniem i niezwiązanych z nimi i polegać na zmianach molekularnych, które rozwijają się po naprawie uszkodzeń DNA wywołanych promieniowaniem, które są stymulowane przez niestabilność genomu, która utrzymuje się w potomstwie. eksponowanych komórek (47,48). Podsumowując, podajemy tutaj nowy mechanizm aktywacji BRAF in vivo poprzez inwersję chromosomu 7q, prowadząc do fuzji BRAF z genem AKAP9. AKAP9-BRAF funkcjonuje jako onkogen i jest bardziej rozpowszechniony w raku tarczycy z najnowszą historią ekspozycji na promieniowanie. Znaczenie tego badania jest 2-krotne. To pokazuje nowy mechanizm aktywacji BRAF w ludzkich nowotworach, pokazując po raz pierwszy, że wewnątrzkomórkowe efektory wzdłuż szlaku MAPK mogą być aktywowane przez rekombinację. Ponadto wykazuje korelację pomiędzy naturą mutagenu a mechanizmem mutacji i sugeruje, że paracentryczne inwersje chromosomowe stanowią powszechny mechanizm genetyczny karcynogenezy tarczycy związanej z promieniowaniem. Metody Próbki guza. Zamrożone tkanki pochodzące ze sporadycznych raków tarczycy uzyskano z Wydziału Patologii Uniwersytetu w Cincinnati, po instytucjonalnie zatwierdzonym protokole pobierania tkanek i przez Spółdzielczą Sieć Tkanek Ludzkich. Nowotwory po Czarnobylu z białoruskich pacjentów poddanych operacji w 1991 r. 92 były dostępne jako archiwalna tkanka zatopiona w parafinie. Próbki od białoruskich pacjentów poddanych operacji w 1995 r. 1998 r. Pochodziły z Oddziału Doświadczalnego Instytutu Patologii Uniwersytetu Monachijskiego i były dostępne jako RNA wyekstrahowany z zamrożonej tkanki; były ujemne dla rearanżacji RET / PTC i TRK (35). Badanie zostało zatwierdzone przez University Cincinnati Institutional Review Board. Analiza FISH. Preparaty dotyku nowotworu wykonano z zatrzaśniętych tkanek. Klony PAC dla BRAF (RP4-726N20, RP5-839B19, RP4-813F11) otrzymano z BAC / PAC Resources, Children s Hospital Oakland i klonów sztucznych chromosomów bakteryjnych (BAC) dla AKAP9 (CTB-104F4, CTB-161K23) od Open Biosystems. Sondy znakowano przez translację nicka przy użyciu odpowiednio SpectrumOrange-dUTP i SpectrumGreen-dUTP (Vysis Inc.). Próbkę centromerową (3-salat DNA dla chromosomu 7 otrzymano z Vysis Inc. Nuclei wybarwiono kontrastowo DAPI. Mikroskopię przeprowadzono za pomocą konfokalnego laserowego mikroskopu skaningowego Leica Microsystems TCS 4D z cyfrowym rejestrowaniem obrazu. Dla każdego preparatu oceniano sto zarodków. 5. WYŚCIG. Pięćdziesiąt mikrogramów poli (A) + RNA z przypadku indeksu wykorzystano dla 5. WYŚCIG z 5. System RACE do szybkiego amplifikacji końców cDNA (Invitrogen Corp.). Startery swoiste dla genu BRAF zaprojektowano do syntezy cDNA (5a-GATGACTTCTGGTGCCATCC-3a, 5a-AACTGCTGAGGTGTAGGTGCTGTC-3a i 5a-GTCTCGTTGCCCAAATTGAT-3a) i do następnych reakcji PCR (5a-TTTCACTGCCACATCACCAT-3. dla pierwszej PCR i 5a-TCACTCGAGTCCCGTCTACC-3 (3 dla nested PCR). 5. Produkty RACE wycięto z żelu, oczyszczono i zsekwencjonowano za pomocą zautomatyzowanego sekwencera ABI 377 (PerkinElmer). Analiza klonowania i sekwencjonowania. Całkowity RNA zastosowano do amplifikacji ORF chimerycznego cDNA przy użyciu starterów umiejscowionych w 5 (3-nieulegającym translacji regionie AKAP9 (5a-ACCACCCCTCAACCCCTGTTTT-3 (3) i nieprzekładalnym regionie 3 (3 BRAF (5a-TTCCTTTTGTTGCTACTCTCCTGA-3 (3)).
[więcej w: inteligencja interpersonalna, dom zdrojowy szczawno zdrój, sushi a karmienie piersią ]
[przypisy: sanatorium krynica górska, szpital psychiatryczny lublin, pierwsza pomoc oparzenia ]