Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T czesc 4

Sekwencje V. 4 wykryto w 7/8 produktów PCR i 5/5 sekwencji klonów, potwierdzając dane cytometrii przepływowej i spektroskopii. Chociaż stwierdzono dominującą sekwencję, można wyraźnie wykazać tło poliklonalne, ujawniając bardziej zróżnicowane spektrum na poziomie molekularnym (Figura 8). Analiza . sekwencje ujawniły pewne złożone regiony łącznikowe z lub 2 elementami D, podczas gdy w 2 sekwencjach brakowało elementów D. Continue reading „Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T czesc 4”

Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T cd

Dwadzieścia procent TCR. komórki i 88% Komórki TCR były podwójnie negatywne pod względem ekspresji CD4 i CD8. Ekspresja HLA-DR i CD45RA była podobna dla dwóch populacji (Figura 3). Proliferacja komórek T była nieobecna w antygenie tężcowym i zmniejszona po stymulacji fitohemaglutyniną (PHA) (21, 661 vs.> 40 000 cpm w kontrolach) lub anty-CD3 (16 960 vs.> 34 000 cpm), ale mogła być silnie indukowana przez stymulację IL-2 ( 33 736 vs.> 000 cpm). Aby oddzielnie przeanalizować zdolność proliferacyjną różnych populacji limfocytów T, wykorzystano test proliferacji oparty na cytometrii przepływowej opartej na CFSE. Continue reading „Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T cd”

Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T ad

Jednak były normalne do podwyższonych poziomów immunoglobulin w surowicy. Pacjent został przeniesiony do naszej służby w celu dalszego zarządzania. Tabela Porównanie fenotypów klinicznych i immunologicznych u 3 pacjentów z mutacją homozygotycznych R561H RAG1 Dziewczynka ustabilizowała się po leczeniu gancyklowirem, ale następnie rozwinęła się w niejednolite nacieki owalne w płucu (Figura 1A) i porażenie twarzy spowodowane sterylnym zapaleniem wyrostka sutkowatego. Biopsje z obu zmian wykazały gęstą polimorficzną limfoproliferację z obszarami nekrozy i zwyrodnieniem rzekomowiskowym. Średnie do dużych komórek limfoidalnych CD20 + (Figura 1B) z rozproszonymi komórkami CD15. Continue reading „Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T ad”

Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T

Opisujemy tutaj pacjenta z kliniczną i molekularną diagnozą SCID aktywującego rekombinazę z niedoborem genu (niedobór RAG1), który wytworzył swoiste przeciwciała pomimo minimalnej liczby komórek B. Wykryto komórki pamięci B i wytworzono przeciwciała nie tylko przeciwko niektórym szczepionkom i infekcjom, ale także przeciwko autoantygenom. Pacjent miał znacznie obniżone poziomy oligoklonalnych limfocytów T wyrażających. TCR, ale zaskakująco normalna liczba komórek T wyrażających. TCR. Continue reading „Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T”

Antysensowne hamowanie białka zapalnego makrofagów 1- blokuje niszczenie kości w modelu choroby szpiczaka kości cd

Trzy miliony komórek WT-ARH, komórek AS-ARH lub komórek EV-ARH wstrzyknięto dożylnie myszom SCID, które otrzymały napromienianie całego ciała w dawce 3,75 Gy 24 godziny przed przeszczepieniem. Wykazaliśmy wcześniej, że ten protokół jest wystarczający do wywołania choroby szpiczaka kości u tych myszy w ciągu 28. 35 dni po transplantacji (1). Zwierzęta następnie obserwowano pod kątem rozwoju choroby szpiczaka, hiperkalcemii i przeżycia, jak opisano wcześniej (1). Gdy zwierzęta rozwinęły paraplegię, zostały poddane eutanazji, a kręgi i kości długie poddano analizie histomorfometrycznej dla powierzchni OCL i osteoblastów, erozji powierzchni, OCL na jednostkę powierzchni i objętości guza, jak opisano wcześniej (8). Continue reading „Antysensowne hamowanie białka zapalnego makrofagów 1- blokuje niszczenie kości w modelu choroby szpiczaka kości cd”

Antysensowne hamowanie białka zapalnego makrofagów 1- blokuje niszczenie kości w modelu choroby szpiczaka kości ad

Komórki ARH (105) w fazie wzrostu wykładniczego wysiewano na pożywkach RPMI-1640 zawierających 10% FBS (Life Technologies Inc., Rockville, Maryland, USA) w sześcio-studzienkowe płytki przez 24 godziny, a następnie transfekowano MIP-1. konstrukt antysensowny lub pusty wektor przy użyciu Lipofectamine Plus (Life Technologies Inc.) w pożywce bez surowicy, zgodnie z protokołem producenta. Dwadzieścia cztery godziny po transfekcji pożywki usunięto i dodano świeżą pożywkę zawierającą 10% FBS i 500 .g / ml G418. Po 2 tygodniach hodowli z G418, komórki ARH rozcieńczono na 96-studzienkowych płytkach w celu wyizolowania pojedynczych klonów, klonów ekspandowano i poziomów ekspresji MIP-1. zostały określone przy użyciu ludzkiego MIP-1. Continue reading „Antysensowne hamowanie białka zapalnego makrofagów 1- blokuje niszczenie kości w modelu choroby szpiczaka kości ad”

Antysensowne hamowanie białka zapalnego makrofagów 1- blokuje niszczenie kości w modelu choroby szpiczaka kości

Niedawno zidentyfikowaliśmy białko zapalne makrofagów 1-. (MIP-1 a) jako czynnik produkowany przez komórki szpiczaka mnogiego (MM), które mogą być odpowiedzialne za niszczenie kości w MM (1). Aby zbadać rolę MIP-1. w chorobie kostnej MM in vivo, ludzka linia komórkowa ARH pochodząca od MM5 była trwale transfekowana konstruktem antysensownym do MIP-1. (AS-ARH) i testowano pod kątem jego zdolności do indukowania choroby kości MM u myszy SCID. Continue reading „Antysensowne hamowanie białka zapalnego makrofagów 1- blokuje niszczenie kości w modelu choroby szpiczaka kości”

Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T ad 7

Proliferację limfocytów T określono ilościowo, stosując standardową inkorporację [3H] tymidyny i test proliferacji CFSE. W tym celu 5 x 106 komórek PBMC znakowano barwnikiem fluorescencyjnym CFSE (Invitrogen Corp.) przez 10 minut i przemyto dwukrotnie lodowatym PBS. PBMC znakowane CFSE (2,5 x 105) w objętości 200 ul zmodyfikowanego Dulbecco. S Medium 10% FCS stymulowano albo fitohemaglutyniną (1,25. G / ml) albo z kulkami anty-CD3 / anty-CD28 ( Dynal Biotech) w 37 ° C. Continue reading „Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T ad 7”

Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T ad 6

Wyliczenie podzbioru limfocytów u 3 pacjentów było podobne, z niemal całkowitym brakiem limfocytów B, zmniejszoną liczbą limfocytów T i prawidłowym poziomem komórek NK, co prawdopodobnie odzwierciedla konsekwencje zaburzonej rekombinacji V (D) J dla rozwoju limfocytów ( Tabela 1). Kliniczny i funkcjonalny fenotyp immunologiczny był jednak inny i charakterystyczny dla wszystkich 3 pacjentów. Pacjent OS2 przedstawił OS, w tym erytrodermię, limfoproliferację, a także podwyższone poziomy IgE i eozynofilii. IgA i IgM były nieobecne, a poziom IgG był niski w wieku 2 miesięcy i prawdopodobnie reprezentował przeniesione przeciwciało matki. Nie wykryto specyficznych przeciwciał (31, 32). Continue reading „Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T ad 6”

Nadekspresja Cyclin D1 i inaktywacja p53 unieśmiertelniają pierwotne keratynocyty doustne za pomocą mechanizmu niezależnego od telomerazy

Uniemiernianie komórek ludzkich jest krytycznym krokiem w wieloetapowej karcynogenezie. Raki jamy ustnej i przełyku, modelowy system do badania mechanizmów molekularnych leżących u podstaw płaskonabłonkowego raka, często wiążą się z nadekspresją cykliny D1 i inaktywacją supresora guza p53. Dlatego naszym celem było ustalenie funkcjonalnej roli nadekspresji cykliny D1 i inaktywacji p53 w unieśmiertelnieniu pierwotnych ludzkich komórek nabłonka łuski (keratynocytów) jako ważnego kroku w kierunku transformacji nowotworowej. Wykazano, że sama nadekspresja cykliny D1 indukuje wydłużenie okresu replikacji normalnych doustnych keratynocytów, podczas gdy kombinacja nadekspresji cykliny D1 i inaktywacji p53 prowadzi do ich unieśmiertelniania. Badanie to pokazuje również, że unieśmiertelnienie keratynocytów w jamie ustnej może być niezależne od aktywacji telomerazy, obejmując alternatywny szlak utrzymania telomerów (ALT). Continue reading „Nadekspresja Cyclin D1 i inaktywacja p53 unieśmiertelniają pierwotne keratynocyty doustne za pomocą mechanizmu niezależnego od telomerazy”