Wariant SCID ze specyficznymi odpowiedziami immunologicznymi i przewagą Komórki T cd

Dwadzieścia procent TCR. komórki i 88% Komórki TCR były podwójnie negatywne pod względem ekspresji CD4 i CD8. Ekspresja HLA-DR i CD45RA była podobna dla dwóch populacji (Figura 3). Proliferacja komórek T była nieobecna w antygenie tężcowym i zmniejszona po stymulacji fitohemaglutyniną (PHA) (21, 661 vs.> 40 000 cpm w kontrolach) lub anty-CD3 (16 960 vs.> 34 000 cpm), ale mogła być silnie indukowana przez stymulację IL-2 ( 33 736 vs.> 000 cpm). Aby oddzielnie przeanalizować zdolność proliferacyjną różnych populacji limfocytów T, wykorzystano test proliferacji oparty na cytometrii przepływowej opartej na CFSE. Stymulacja z użyciem kulek anty-CD3 / anty-CD28 lub z tylko PHA powodowała proliferację wśród CD4 +, ale nie wśród komórek T CD8 + (Figura 4). Wśród dzielących się limfocytów T ekspresja. Nie można wykazać TCR. Rysunek 3 Zdolność aktywacji Komórki T. (A) ekspresja TCR wśród limfocytów CD3 + u pacjenta i zdrowa kontrola. (B) Ekspresja CD4 i CD8 wśród komórek T CD3 + TCR + i CD3 + TCR +. (C) Ekspresja CD4 i CD45RA wśród limfocytów T CD3 + TCR + i CD3 + TCR +. (D) Ekspresja CD4 i HLA-DR wśród komórek T CD3 + TCR + i CD3 + TCR +. Rycina 4T odpowiedzi proliferacyjne komórek. PBMC od pacjenta i zdrową kontrolę znakowano barwnikiem fluorescencyjnym CFSE i inkubowano w pożywce lub stymulowano PHA lub z kulkami anty-CD3 / anty-CD28. Pięć dni później komórki wybarwiono anty-CD4 i anty-CD8 i analizowano za pomocą cytometrii przepływowej. Rozcieńczenie CFSE wykreślono jako nakładkę komórek inkubowanych w pożywce (linia przerywana) w porównaniu z komórkami inkubowanymi ze wskazanym bodźcem (linia pogrubiona). Analiza różnorodności receptorów komórek T. Aby scharakteryzować repertuar komórek T pacjenta, najpierw przeanalizowaliśmy ekspresję różnych V. więzy. Występował znacznie wypaczony repertuar, z preferencyjną ekspresją V. 9 i V. 28 wśród komórek T CD8 + (Figura 5A). Pacjent nie miał wystarczającej liczby limfocytów T CD4 + do tej analizy. Dla bardziej szczegółowego badania różnorodności receptora komórek T, określanie komplementarności regionu. 3 (CDR3) dla niektórych V. rodziny zostały wykonane. Większość 10 V. analizowane elementy wykazały oligoklonalne pochylenie (Figura 5B). Analiza niektórych pierwiastków (Va 11, -14, -15, -20) również ujawniła obecność pojedynczych pików, demonstrując istnienie dominujących klonów wyrażających te konkretne V. więzy. Obecność takich dominujących klonów została potwierdzona przez analizę heterodupleksu (Figura 6). Ryc. 5T repertuar komórek. (A) V. ekspresja łańcucha w limfocytach T CD8 + określona metodą cytometrii przepływowej. (B) profil długości CDR3 różnych V. populacje określone na podstawie analizy immunoskopowej. Względną intensywność pasm wykreślono jako funkcję wielkości CDR3. Ponieważ nazewnictwo zastosowanych przeciwciał opiera się na Wei et al. (37), odpowiednia nomenklatura IGMT jest również dostarczona w celu skorelowania danych cytometrycznych z wynikami spektromatowania. Figura 6 Rozszerzenia limfocytów T w świetle. Analizę heteroprzeszczepu produktów PCR przeprowadzono za pomocą nieendenującej PAGE i wizualizowano za pomocą barwienia bromkiem etydyny. Analiza V. i V. wyrażenie łańcucha ujawniło, że 76%. Komórki T wykorzystywały element V. 3, a 89% wykorzystywało element V. 4 (Figura 7, A i C). Spektrowanie CDR3 również zostało ustanowione dla. Limfocyty T i ujawnił oligo- i poliklonalny repertuar komórek przy użyciu segmentów V (1 i V (2 (Figura 7B). W przeciwieństwie do tego, wśród komórek wykazujących ekspresję łańcucha V (3, istniało znacznie ograniczone widmo o silnie oligoklonalnym profilu komórek z wykorzystaniem elementu V3-3J1 (figura 7B). Analiza spektrograficzna TCR. łańcuch przeprowadzono ze starterami dla V. 4, dla V. Podgrupy (do wykrywania genów funkcjonalnych V. 2, -3, -4, -5 i -8) i podgrupy II (specyficzne dla V. 9). Elementy obu podgrup wykorzystano w bardzo ograniczonym profilu długości (Figura 7D). Podobny profil uzyskano przy V. 4 i V. podgrupa I podgrupy potwierdziła preferencyjne zastosowanie elementu V. 4, jak pokazano za pomocą cytometrii przepływowej. Ryc. 7. Analiza repertuaru komórek. (A) V. wykorzystanie łańcucha wśród całkowitej. Komórki TCR + CD3 +. (B) Profil długości CDR3 populacji Vpla-ApV 3, przy użyciu starterów specyficznych dla Jp1-Jp3p, określonych przez analizę immunoskopową. (C) V. wykorzystanie łańcucha wśród całkowitej. Komórki TCR + CD3 +. (D) profil długości CDR3 V. populacje wykorzystujące startery specyficzne dla Vp4, Vis (specyficzne dla podgrupy I) i Vs9 (specyficzne dla podgrupy II). Aby przeanalizować. Repertuar komórek T na poziomie molekularnym, PBT TCR + oczyszczono i sklonowano przez ograniczone rozcieńczenie. TCR. i . sekwencje uzyskano z tych klonów i produktów PCR amplifikowanych do analizy spektroskopowej
[podobne: eve online polska, eve online poradnik, dom zdrojowy szczawno zdrój ]
[przypisy: łyżeczka cukru ile to gram, sanatorium krynica górska, szpital psychiatryczny lublin ]