Hiperhomocysteinemia wzmaga stan zapalny naczyń i przyspiesza miażdżycę tętnic w modelu mysim ad 5

Immunohistochemia wykazała, że EN-RAGE wyrażano w zmianach miażdżycowych w sposób zwiększony u myszy karmionych dietą B w porównaniu z dietą A (odpowiednio, Figura 4, cib). Dalsze dowody globalnej aktywacji komórkowej za pośrednictwem HC zostały wykazane przez obserwację, że poziomy TNF-a w osoczu zostały zwiększone 6.1-krotnie u myszy HHcy karmionych dietą B w porównaniu z karmioną dietą kontrolną A (Figura 4e). Figura 4 Włączenie HHcy wzmaga zapalenie naczyń, ekspresję i aktywność MMP-9 i zwiększa elastyczność w tkance aortalnej z myszy pozbawionych apoE. Myszy ApoE-null karmiono wskazaną dietą przez 8 tygodni. (a. d) EN-RAGE. W aortach usunięto aorty i przygotowano lizaty. Białko (10 .g) poddano immunoblottingu z króliczą anty-EN-RAGE IgG (2 .g / ml). AP <0,01 w porównaniu z dietami A i C. W bd. Przeprowadzono analizę immunohistochemiczną zmian miażdżycowych od myszy karmionych dietą A, B lub C. Skala słupkowa, 50 .m. (e) TNF-a. Osocze pobrano od myszy i przeprowadzono ELISA w celu wykrycia mysiego TNF-a. AP <0,01 vs. diety A i C. (f i g) MMP-9. W f, lizaty z aorty poddano immunoblottingowi przy użyciu IgG anty-MMP-9 (1 .g / ml). In g, zymografia została wykonana przy użyciu żelatynowych żeli. W f i g, BP <0,05 vs diety A i C. W a, f, i g, znaczniki masy cząsteczkowej są wskazane. Przeprowadzono analizę densytometryczną; jednostki pikselowe z tkanki aortalnej pochodzące od myszy otrzymujących dietę A zostały arbitralnie przypisane wartości względnej 1. W a, e, f, g, immunoblotach lub zymogramach dokonano na n = 7 myszach / diecie; Przedstawiono reprezentatywne eksperymenty. W bd, przeprowadzono analizę immunohistochemiczną n = 5 myszy / dietę; Przedstawiono reprezentatywne eksperymenty. (h). Określanie zakresu elastolizy. Zmiany oceniano pod kątem elastolizy, jak opisano powyżej. Zbadano wszystkie zmiany w n = 10 myszach / diecie. AP <0,01 w porównaniu z dietami A i C. W świetle tych wyników sugerujących zwiększoną odpowiedź prozapalną w układzie naczyniowym HHcy, ocenialiśmy poziomy i aktywność enzymów niszczących tkanki, takich jak MMP, ponieważ wcześniejsze badania sugerowały, że białko MMP i aktywność, obecne w miażdżycy tętnic płytka nazębna, może sprzyjać niestabilności i pękaniu zmian naczyniowych (37. 38). W porównaniu z myszami karmionymi dietą A, myszy HHcy wykazały około pięciokrotny wzrost poziomów antygenu MMP-9 przez immunoblotting (Figura 4f). Co ważne, badania zymograficzne ujawniły zwiększoną aktywność MMP-9 w tkance aortalnej otrzymanej od myszy z HHcy (dieta B) w porównaniu z myszami karmionymi normalną karmą (Figura 4g). Zgodnie z tymi obserwacjami, badanie elastycznych włókien leżących u podłoża zmian miażdżycowych w zatoce aortalnej zabarwionej metodą van Giessena wykazało istotnie zwiększoną elastolizę u myszy otrzymujących dietę B w porównaniu z myszami karmionymi karmą (Figura 4h). Oprócz regulacji genów zapalnych wiele badań sugeruje, że HHcy wiąże się ze zmienionymi poziomami czynników niezbędnych do precyzyjnej kontroli enzymów hemostatycznych, zakrzepowych i fibrynolitycznych (39). Nawet niewielkie różnice w poziomach takich czynników prawdopodobnie leżą u podstaw obserwowanej zwiększonej częstości występowania żylnej i tętniczej choroby zakrzepowo-zatorowej, która występuje u ludzi z HHcy. Zbadaliśmy koncepcję, że narażenie śródbłonka na HC może zmienić równowagę hemostatyczną, ponieważ niestabilność blaszki miażdżycowej jest powiązana, przynajmniej częściowo, ze zdarzeniami zakrzepowymi w ścianie naczynia (40. 41). Ponieważ TF jest kluczowym czynnikiem wyzwalającym szlak prokoagulacyjny in vivo, oceniano jego ekspresję w ustawieniu HHcy. W warunkach in vitro HUVEC eksponowane na L-HC wykazywały około 5,2-krotny wzrost antygenu TF przez immunoblotting w porównaniu z HUVEC traktowanymi L-cysteiną (100. M) lub BSA (Figura 5a, ścieżki 2, 3 i 1, odpowiednio) . Zgodnie z tymi obserwacjami, immunoblotting wyciągów aortowych przygotowanych z myszy HHcy karmionych dietą B wykazał około 7,5-krotny wzrost poziomów prokoagulacyjnego TF w porównaniu z myszami karmionymi karmą (Figura 5b). Ekspresja TF w dużym stopniu kolokalizowała się z ekspresją Mac-3, identyfikując makrofagi jako dominujące źródło TF w zmianach naczyniowych myszy apoEflull z HHcy (odpowiednio Figura 5, gid). Podsumowując, odkrycia te sugerują, że indukcja HHcy przyspiesza powstawanie zmian miażdżycowych i ich złożoność oraz nasilone zapalenie naczyń, nadkrzepliwość i molekularne mediatory niestabilności płytki nazębnej. Głównym pytaniem wynikającym z tych obserwacji i badań epidemiologicznych u ludzi jest to, czy supresja HHcy może modulować przebieg aterogenezy. Aby to przetestować, przygotowaliśmy dietę wzbogaconą w metioninę, a także witaminy niezbędne do metabolizmu HC, kwasu foliowego i witamin B6 / B12 (dieta C) [przypisy: rezonans magnetyczny kościerzyna, nowotwór pęcherzykowy tarczycy, polskie produkty spożywcze ] [hasła pokrewne: dawstwo komórek jajowych, dom zdrojowy szczawno zdrój, nowotwór pęcherzykowy tarczycy ]