Komórkowa odpowiedź immunologiczna związana z chorobą u cukrzyków typu 1 z immunodominującym epitopem insuliny ad

Przeciwnie, choroba jest w przeważającej mierze mediowana przez autoreaktywne odpowiedzi komórkowe na CA (2). Jednak nieoczekiwanie, odpowiedź proliferacyjna limfocytów T na proinsulinę lub całe białko insuliny nie wydaje się podwyższona u pacjentów z przedcukrzycą lub u pacjentów z cukrzycą typu o niedawnym początku w porównaniu z normalnymi osobami kontrolnymi (12. 18). Chociaż obserwacja ta wydaje się niezgodna z dominującymi odpowiedziami komórkowymi anty-insuliny stwierdzonymi w chorobie NOD, jest to specyficzna dla insuliny B (9. 23) odpowiedź charakterystyczna dla choroby mysiej (4. 6), i niekoniecznie odpowiedź na całe białko insuliny. W związku z tym zajęliśmy się tym, czy bardziej ograniczona odpowiedź epitopów na insulinę jest również charakterystyczna dla cukrzycy typu u ludzi poprzez ustalenie, czy podwyższone odpowiedzi komórkowe specyficzne dla insuliny B (9. 23) istnieją u pacjentów z cukrzycą typu o prediabetyce i o niedawnym początku. Metody Przedmioty. Pisemną i świadomą zgodę uzyskano od 12 pacjentów z cukrzycą typu o wczesnym początku (P1. P12), pięciu prediabetycznych krewnych pierwszego stopnia u chorych na cukrzycę typu 1, którzy byli narażeni na wysokie ryzyko cukrzycy (H1. H5), 26 osób z prawidłową kontrolą bez cukrzycy (C1-C26) i dwóch osobników kontrolnych na cukrzycę typu 2 (C27 i C28), którzy otrzymali terapię insulinową odpowiednio przez 5 i 20 lat, przed włączeniem do tego badania (tabele i 2). Pacjentów uznano za mających niedawny początek w ciągu 3 miesięcy (tj. 130 dni) od rozpoznania. Kryteriami diagnostyki pacjentów w cukrzycy typu była ketoza cukrzycowa i kwasica ketonowa, poliuria, polidypezja i utrata masy ciała, a następnie ocena poziomu autoprzeciwciał w surowicy i typowania antygenu ludzkiego leukocytów (HLA). Tabela Haplotypy żylne, płeć i HLA chorych na cukrzycę typu i osób z prediabetią, u których występuje wysokie ryzyko cukrzycy Tabela 2 Haplotypy normalnych, bezcukrzycowych i HLA normalnych pacjentów z cukrzycą bez cukrzycy i typu 2 Poziomy surowicy anty-GAD65 i anty-IA-2 przeciwciało mierzono RIA konkurencyjnej w fazie ciekłej, jak opisano wcześniej (19, 20), a poziomy IAA mierzono za pomocą testu mikro białka A (21). Do badania włączono dodatnie i ujemne surowice kontrolne, które wykorzystano do obliczenia wskaźnika dla poziomów przeciwciał, jak opisano w następującym równaniu: (nieznana wartość próbki. Wartość kontroli ujemnej) / (wartość kontroli negatywnej kontroli dodatniej). Górne normalne wartości graniczne dla każdego poziomu surowicy autoprzeciwciał zostały ustalone jako trzykrotność setnego percentyla w 241 zdrowych kontrolnych, przy użyciu analizy Krzywej Operatora Odbioru, która była większa niż 0,071 (IA-2), większa niż 0,032 (GAD65) i większa niż 0,01 (insulina) (22). Pomiar poziomu autoprzeciwciał w surowicy od 12 pacjentów z cukrzycą typu wykazał, że dziesięciu pacjentów było dodatnich pod względem przeciwciała anty-GAD65, pięciu było dodatnich pod względem przeciwciała anty-IA-2, a tylko dwóch było dodatnich pod względem przeciwciała anty-insuliny (Tabela 3) . Co ciekawe, pacjent P8 był jedynym pacjentem, który zademonstrował dramatyczną odpowiedź endogennego przeciwciała anty-insuliny, któremu towarzyszyły znaczące odpowiedzi przeciwciał anty-GAD65 i anty-IA-2. Kryteria oceny prediabetyki przy wysokim ryzyku cukrzycy były następujące: (a) krewni pierwszego stopnia, (b) ekspresja haplotypów HLA związanych z chorobą (tj. HLA-DR3 / 4, -DQ2 / 8; Tabela 1) i (c) dodatnie dla autoprzeciwciał w surowicy (Tabela 3). Poziom autoprzeciwciał był drugorzędny względem względnego stanu pierwszego stopnia i haplotypu HLA, ponieważ tylko trzech z czterech badanych osobników było pozytywnych wobec autoprzeciwciał. Tabela 3 Poziomy autoprzeciwciał w porównaniu do autoprzeciwciał wyspowych u chorych na cukrzycę typu i osób z prediabetią, u których występuje wysokie ryzyko cukrzycy Typowanie HLA przeprowadzono przez amplifikację PCR ze starterami specyficznymi dla sekwencji dla alleli DR i DQ (23) na Uniwersytecie Kalifornijskim, Los Angeles, Tissue Laboratorium pisania. Większość pacjentów z cukrzycą typu wykazała wysokie ryzyko alleli DQ i DR [tj. HLA-DQ8 (DQB1 * 0302; 33%), -DQ2 (DQB1 * 0201; 58%), -DR3 (DRB1 * 0301; 58% ) i -DR4 (DRB1 * 0401 do 0405; 42%)] (Tabela 1), które były również reprezentowane w 12 z pierwszych 14 osób bez kontroli cukrzycy [tj. HLA-DQ8 (DQB1 * 0302; 64%), -DQ2 (DQB1 * 0201; 21%), -DR3 (DRB1 * 0301; 21%) i -DR4 (DRB1 * 0401 do 0405; 79%)] (tabela 2). W rzeczywistości, kombinacje wysokiego ryzyka DR4 / DQ8 lub DR3 / DQ2 były obecne u dziesięciu z 12 pacjentów i u 14 z 26 osób z prawidłową kontrolą bez cukrzycy. Średni wiek chorych na cukrzycę typu wynosił 11. 3 lata (zakres: 8-15 lat), który był reprezentowany przez trzech bezcukrzycowych, względnie normalnych osób zdrowych pierwszego stopnia (C11