Regulacja rozprzestrzeniania się napadów przez neuroserpinę i tkankowy aktywator plazminogenu jest niezależna od plazminogenu cd

Aby zbadać rolę tPA w indukowanej przez KA progresji napadów i indukowanej napadowej śmierci neuronów w hipokampie, ważne jest zastosowanie modelu, w którym komórki hipokampa nie są w bezpośrednim kontakcie z KA. W przeciwieństwie do innych badań (5), w których śmierć komórek była spowodowana bezpośrednim działaniem KA w hipokampie, w niniejszym badaniu ekscytotoksynę wstrzyknięto do ciała migdałowatego, struktury mózgu, która jest częścią układu limbicznego, ale jest odległa od hipokamp. Analiza mózgów, którym wstrzyknięto 3H-KA w stężeniu 35-krotnie wyższym niż te stosowane w niniejszym badaniu, wykazała, że mniej niż 2% 3H-KA osiągnęło hiperampoksem ipsilateralnym nawet godzinę po wstrzyknięciu (nie pokazano). Tak więc, jakiekolwiek efekty obserwowane w warstwach komórek hipokampu są konsekwencją aktywności napadowej, a nie samej KA. Rysunek pokazuje schemat zastosowanego modelu. Rycina Model napadów indukowanych przez KA w układzie limbicznym. Przedstawiono schemat przekroju koronalnego przez jądra hipokampu szczura i jądra migdałowatego. KA wstrzykiwano do jądra migdałowatego (a). Przerywane strzałki pokazują rozprzestrzenianie się nieprawidłowej aktywności elektrycznej, pochodzącej z ciała migdałowatego, najpierw do strony ipsilateralnej (b), a następnie do przeciwnej (c) hipokampa przez ciało modzelowate (d). Neuroserpin lub PBS wstrzykiwano do hipokampa ipsilateralnego do ciała migdałowatego wstrzykniętego KA (b). Napady drgawkowe indukują aktywność TPA i antygen neuroserpina w całym układzie limbicznym. Wcześniejsze badania wykazały, że napady indukowane eksperymentalnie zwiększają ekspresję genu tPA w mózgu (2) i uważa się, że tPA pośredniczy w indukowanej ekscytotoksyną śmierci komórkowej (5). Podobnie, aktywność tPA jest zwiększona w modelach udaru niedokrwiennego, a leczenie neuroserpiną lub nadekspresją zmniejszają śmierć komórek nerwowych w tych modelach (13, 14). W związku z tym zbadano wpływ napadów wywoływanych eksperymentalnie na aktywność tPA i antygen neuroserpinowy w układzie limbicznym za pomocą zymografii in situ i immunofluorescencji (Figura 2). Zarówno aktywność TPA, jak i antygen neuroserpiny wykryto w ciele migdałkowym ipsilateralnym w ciągu 10 minut po wstrzyknięciu KA (Figura 2a). W 30 minut po wstrzyknięciu KA zarówno tPA, jak i neuroserpina wydawały się zwiększać w obrębie ipsilateralnego ciała migdałowatego (ryc. 2d), a także zostały wykryte w obrębie hipokampa po stronie ipsilateralnej (ryc. 2e). W 60 minut po wstrzyknięciu KA zarówno aktywność tPA, jak i antygen neuroserpiny były wyraźnie widoczne w przeciwległym hipokampie (Figura 2i). Aktywność proteolityczna była spowodowana tPA, ponieważ nie obserwowano aktywności pod nieobecność plazminogenu w żelu powlekającym (nie pokazano), a ponieważ włączenie przeciwciał anty-tPA w zymografii całkowicie blokowało aktywność (Figura 2, j. , górne panele). Wyniki te sugerują, że wstrzyknięcie KA do ciała migdałowatego indukuje progresywny wzrost aktywności tPA w układzie limbicznym. Jednoczesne zwiększenie liczby antygenów neuroserpiny w tych samych strukturach sugeruje rolę neuroserpiny w regulowaniu działania tPA podczas progresji drgawek. Figura 2Kinetyczna analiza aktywności tPA i antygenu neuroserpin w układzie limbicznym podczas napadu. Napady wywołano przez wstrzyknięcie KA do ciała migdałowatego, jak opisano w Methods, i zwierzęta poddano eutanazji w 10, 30 i 60 minut po wstrzyknięciu. Skrawki kriostatu wybarwiono DAPI w celu wizualizacji jąder, a następnie analizowano pod kątem aktywności tPA in situ przez zymografię z użyciem plazminogenu i kazeiny z wewnątrz wygaszoną kazeiną fluorescencyjną (czerwoną) lub antygenem neuroserpinowym przez immunofluorescencję (zielony). Górny panel każdej części pokazuje aktywność tPA, a dolny panel każdej części pokazuje antygen neuroserpin (. Ns). (a. c) Dziesięć minut po wstrzyknięciu KA; (d. f) 30 minut po wstrzyknięciu; (g. i) 60 minut po wstrzyknięciu. (j. l) Panele górne: 60 minut po wstrzyknięciu KA, z przeciwciałami anty-tPA (. tPA) w nakładce; dolne panele: normalny mózg szczura bez iniekcji KA. a, d, g i j pokazują błonę jądrową podstawno-boczną ipsilateralną (Ipsi) w miejscu wstrzyknięcia; b, e, h i k pokazują ipsilateralny hipokamp; c, f, i i ja pokazujemy hipokamp przeciwnej (Contra). Oryginalne powiększenie, × 100. Neuroserpin blokuje indukowaną ekscytotoksami śmierć komórki. Wzrost poziomu neuroserpin obserwowany podczas rozprzestrzeniania się napadów sugeruje, że neuroserpin może odgrywać ważną rolę w przeżyciu komórek po napadach padaczkowych. Aby przetestować tę hipotezę, KA wstrzyknięto do ciała migdałowatego szczurów, po czym bezpośrednio podano PBS lub neuroserpę do hipokampa w kierunku ipsilateralnym. Dwadzieścia cztery godziny później przeprowadzono żywą liczbę komórek w grzbietowym hipokampie
[więcej w: szpital psychiatryczny lublin, dawstwo komórek jajowych, mięśnie grzbietu anatomia ]
[przypisy: sanatorium krynica górska, szpital psychiatryczny lublin, eve centrala ]