Zależna od komórek T produkcja IFN-y przez komórki NK w odpowiedzi na wirus grypy A. ad

PBMC od dorosłego dawcy inkubowano z fluA (A (3F) lub SPG (kontrola ujemna, G i H) przez 17 godzin, z dodaniem brefeldyny A przez ostatnie 5 godzin. Komórki wybarwiono na CD56, utrwalono i permeabilizowano, a następnie wybarwiono pod kątem CD3, IFN-y i perforyny. Zobacz szczegóły metod. Na wykresach punktowych A (3H są komórki bramkowane na różne populacje limfocytów: (A) IFN-y produkcja CD3. i limfocyty CD3 + (bramkowane przez rozpraszanie do przodu i boczne rozpraszanie) w odpowiedzi na fluA; (B) IFN-y wytwarzanie limfocytów CD3 + w odpowiedzi na fluA; (C) IFN-y produkcja CD3. limfocyty w odpowiedzi na fluA; (D) ekspresja CD56 i perforyny przez CD3. limfocyty; (E i F) IFN-y produkcja perforacji CD56dim + NK i CD56bright perforin. Podklasy NK, odpowiednio, w odpowiedzi na fluA; (G i H) kontrole negatywne pokazujące poziomy wyjściowe IFN-y produkcja przez CD3. i limfocyty CD3 + w nieobecności fluA. Liczby na wykresach punktowych odnoszą się do procentu komórek IFN – (3 + w bramkowanej populacji. Aby zbadać IFN-y wytwarzanie przez podzbiory komórek CD56bright i CD56dim komórek NK, PBMC stymulowane przez fluA były kosztowne dla CD56 powierzchni komórkowej i wewnątrzpochodnej perforyny oprócz CD3 i IFN-y. Perforyn jest główną cząsteczką efektorową w szybkiej naturalnej cytotoksyczności. Jak wcześniej podano (27), tylko podzbiór CD56dim komórek NK eksprymował perforinę (Figura 1D). Tak więc populacja komórek CD3A CD56 + NK może być dalej rozdzielona na 2 podzbiory: CD56bright perforin. i CD56dim perforina +. Oba podzbiory wytwarzały IFN-y w odpowiedzi na fluA, z wyższym odsetkiem komórek IFN – (3 + w populacji CD56bright niż w populacji CD56dim (Figura 1, E i F). Gdy PBMC inkubowano w nieobecności fluA, IFN-a nie wytwarzano ani w komórkach NK (Figura 1G) ani w komórkach T CD3 + (Figura 1H), co wskazuje, że IFN-y wytwarzanie zarówno w komórkach NK, jak i komórkach T indukowano fluA. Te same eksperymenty jak te przedstawione na Figurze przeprowadzono z PBMC od 25 dorosłych dawców. Barwienie perforyną włączono we wszystkie eksperymenty w celu polepszenia rozdzielczości populacji CD56bright i CD56dim NK, które, dla niektórych dawców, zachodziły na siebie znacząco, gdy są określone samym natężeniem sygnału CD56 (dane nie pokazane). Dla wszystkich dawców, IFN-. wytwarzanie wykryto dla obu podzbiorów NK w próbkach PBMC inkubowanych z fluA. Zarówno procent komórek NK produkujących IFN-y (Figura 2A) i IFN-y intensywność barwienia (Figura 2B) była zróżnicowana wśród dawców. Procent komórek IFN -. + W perforinie CD56bright. oraz perforacja + podzbiory CD56dim były dodatnio skorelowane (rS = 0,878, P <0,001), przy czym średni procent komórek IFN - (3 + w podzbiorze CD56bright był około 7-krotnie wyższy niż w podzbiorze CD56dim (P <0,001) (Figura 2A) . Ilość IFN-y na komórkę, jak wskazano przez średnią intensywność fluorescencji (MFI) komórek IFN - (3 + w podgrupach NK CD56bright i CD56dim każdego z dawców również były dodatnio skorelowane (rS = 0,716, P <0,001), ze średnią wartością MFI z podzbioru CD56bright około 2-krotnie wyższa niż w podzbiorze CD56dim (P <0,001) (rysunek 2B). Ponieważ liczba komórek NK w podzbiorze CD56dim była w przybliżeniu 10-krotnie wyższa niż w podgrupie CD56bright (dane niepokazane), bezwzględna liczba komórek IFN - (3 + w 2 podgrupach komórek NK z tej samej porcji PBMC była mniej więcej tyle samo (rysunek 2C). Figura 2 IFN-y indukowany przez FluA produkcja przez CD3. CD56bright perforin. Podzbiór komórek NK (oznaczony jako CD56bright) i podzbiór CD3A CD56dimnazyna + NK (oznaczony jako CD56dim) u 25 dawców. PBMC inkubowano z fluA przez 17 godzin, a następnie cytometryczną analizą przepływową cytokin (patrz Metody). Linie łączą pary obserwacji od tego samego dawcy. Czarne słupki oznaczają pozycje grup. oznacza, które zostały porównane przy użyciu sparowanych testów Studenta. Uzyskane poziomy istotności (wartości P) są zgłaszane. W przypadku A i C testy t przeprowadzono na danych przekształconych logarytmicznie. (A) Procent komórek IFN - (3 + w 2 podzestawach komórek NK. (B) IFN-y MFI komórek IFN - (3 + w 2 podgrupach komórek NK. (C) Łączna liczba komórek IFN - (3 + wykryta jednocześnie w 2 podgrupach komórek NK z tej samej próbki PBMC każdego dawcy. Komórki T są wymagane do odpowiedzi IFN-y komórek NK na fluA. Aby ocenić, czy IFN-y Odpowiedź komórek NK na fluA obejmuje inne typy komórek, najpierw ustaliliśmy, czy fluA może bezpośrednio indukować IFN-y produkcja w komórkach NK eksponowanych na wirusa. Oczyszczono komórki NK z komórek PBMC przez zubożenie limfocytów T, komórek B i monocytów przed ich inkubacją z fluA. Tylko poziomy tła IFN-y obserwowano dla podgrup komórek NK CD56bright i CD56dim we wszystkich 4 testowanych dawcach (Figura 3, A i B) [przypisy: sanatorium krynica górska, pierwsza pomoc oparzenia, eve online pl ] [podobne: polskie produkty spożywcze, eve online poradnik, eve online trial ]