Zależna od komórek T produkcja IFN-y przez komórki NK w odpowiedzi na wirus grypy A. cd

IFN-. wytwarzanie indukowano z oczyszczonych komórek NK przez inkubację z rekombinowanymi cytokinami IL-12 i IL-2, co wskazuje, że komórki NK zachowały funkcjonalność po procedurze oczyszczania. Gdy oczyszczone komórki NK inkubowano z rekombinowanym IFN-a w obecności fluA nie wykryto komórek NK IFN-a + (Figura 3B), co wskazuje, że wykrycie komórek NK IFN-a + nie było spowodowane pobieraniem zewnątrzkomórkowego IFN-y. przez komórki NK. Wyniki te pokazują, że IFN-y indukowany przez fluA wytwarzanie komórek NK wymaga innych podzbiorów leukocytów obecnych w PBMC. Figura 3 Oczyszczone komórki NK nie wytwarzają IFN-y w odpowiedzi na fluA. Komórki NK izolowano z PBMC drogą selekcji negatywnej i inkubowano w różnych warunkach, a następnie barwienia wewnątrzkomórkowego dla IFN-y. Wyświetlane na wykresach słupkowych częstości komórek IFN -. + W perforinie CD56bright. (lewe panele) i CD56dim perforina + (prawy panel) podzbiory komórek NK. (A) PBMC lub oczyszczone komórki NK od 3 dawców (nr ^ 3) inkubowano z fluA przez 17 godzin. (B) PBMC lub oczyszczone komórki NK od czwartego dawcy inkubowano z fluA przez 17 godzin. Oczyszczone komórki NK inkubowano również z rekombinowanym IFN-a. (100 ng / ml) w obecności fluA lub z rekombinowaną IL-12 (100 ng / ml) i IL-2 (250 U / ml), przez 17 godzin. Aby ocenić, jakie inne komórki są niezbędne do IFN-y odpowiedzi komórek NK na fluA, w pierwszej kolejności badaliśmy udział limfocytów T. PBMC zubożono w limfocyty T przez selekcję negatywną z Ab anty-CD3. Pozostałe PBMC zubożone w CD3 inkubowano z fluA i badano na IFN-y. produkcja przez komórki NK. W przypadku braku komórek CD3 +, IFN-y produkcja została zredukowana do poziomu tła w obu podgrupach komórek NK, wynik uzyskany dla wszystkich testowanych dawców (Figura 4). Ten wynik wskazuje, że komórki CD3 + są wymagane w przypadku IFN-y. odpowiedź komórek NK na fluA. Figura 4 Usunięcie komórek CD3 + z PBMC zmniejsza się do poziomów tła IFN-y. odpowiedź komórek NK na fluA. Komórki CD3 + zostały zubożone w PBMC 8 dawców (PBMC-CD3). PBMC i PBMC z usuniętymi CD3 inkubowano z fluA przez 17 godzin, a następnie wewnątrzkomórkowe barwienie dla IFN-y. Wyświetlane na wykresach słupkowych częstości komórek IFN -. + W perforinie CD56bright. (po lewej) i CD56dimperforin + (po prawej) podzbiory komórek NK. Wyniki 3 dawców (nr 4. 6) przedstawiono na tej figurze, podczas gdy inne dawców przedstawiono na Figurach 5 i 9 jako część innych eksperymentów. Mały podzbiór populacji CD3 + eksprymował marker komórek NK CD56. Niektóre z tych komórek zostały zdefiniowane jako komórki T NK. Warto zauważyć, że komórki T NK sugerowano, aby zapewniały funkcje pomocnicze do wytwarzania cytokin przez komórki NK (28). Aby określić, czy podzbiór CD3 + CD56 + był wymagany do produkcji IFN-y przez komórki NK w odpowiedzi na fluA, zubożono wszystkie komórki CD3 + lub tylko komórki CD3 + CD56 + z PBMC za pomocą strategii pokazanej na Figurze 5, A i B. Gdy PBMC zubożone w CD3, PBMC zubożone w CD3 + CD56 + i niefrakcjonowane PBMC inkubowano z fluA, IFN-y wytwarzanie w komórkach NK obserwowano w niefrakcjonowanych PBMC i PBMC zubożonych w komórki CD3 + CD56 +, ale nie w PBMC zubożonych w CD3 (Figura 5C). We wszystkich 3 testowanych dawcach poziomy IFN-y produkcja w komórkach NK była zmniejszona do mniej niż 10% pierwotnego poziomu, gdy wszystkie komórki CD3 + zostały zubożone, pozostając przy ponad 80% pierwotnego poziomu, gdy tylko komórki CD3 + CD56 + zostały zubożone (Figura 5C i dane nie pokazane). Ten wynik wskazuje, że tylko CD56. Komórki T są wymagane w przypadku IFN-y produkcja komórek NK w odpowiedzi na fluA. Figura 5FNN-a odpowiedź komórek NK na fluA wymagała CD3 + CD56. komórki, ale nie komórki CD3 + CD56 +. (A) Próbkę krwi podzielono na 2 frakcje. Komórki CD3 + zostały zubożone z frakcji I. Komórki CD56 +, CD36 +, CD19 + i CD16 + zostały zubożone z frakcji II w celu uzyskania wzbogaconego CD56. Komórki T. Połączenie frakcji I i II spowodowało zmniejszenie liczby populacji komórek CD3 + CD56 +. (B) Analiza cytometrii przepływowej niefrakcjonowanych PBMC, PBMC zubożonych w CD3, CD56. Limfocyty T, jak również PBMC zubożone w komórki CD3 + CD56 +. Wyświetlane na wykresach punktowych są komórki bramkowane na populację limfocytów przez rozpraszanie do przodu i rozpraszanie boczne. (C) indukowana przez FluA produkcja IFN-y przez komórki NK w niefrakcjonowanych PBMC, PBMC zubożonych w CD3 i PBMC zubożonych w komórki CD3 + CD56 +. Komórki inkubowano z fluA przez 17 godzin. Wyświetlane są komórki bramkowane na CD3. populacja limfocytów. Liczby na wykresach punktowych są procentami komórek IFN – (3 + wśród komórek NK CD3 + CD56 +. Podobne wyniki uzyskano w doświadczeniach z użyciem próbek krwi od 2 innych dawców. Próbowaliśmy również oszacować korelację między poziomami IFN-y indukowanego przez fluA. produkcja w populacjach komórek NK i T, wykorzystując fakt, że obie odpowiedzi mierzono jednocześnie w tej samej podwielokrotności PBMC od każdego dawcy
[podobne: eve online pl, olej z awokado właściwości, eve online poradnik ]
[hasła pokrewne: eve online polska, eve poradnik, eve online pl ]